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SEM掃描電鏡的微生物樣品制備方法介紹

日期:2024-07-10 09:29:30 瀏覽次數(shù):137

掃描電鏡的微生物樣品制備方法是一個(gè)復(fù)雜但精細(xì)的過程,它確保了微生物樣品在電鏡觀察下的清晰度和準(zhǔn)確性。以下是一個(gè)詳細(xì)的微生物樣品制備方法介紹:

一、取樣

目的:獲取具有代表性的微生物樣品。

操作:使用無菌工具(如無菌剪刀或鑷子)從特定環(huán)境(如陽極表面、培養(yǎng)基等)中取樣。取樣時(shí)應(yīng)注意避免污染,保持樣品的原始狀態(tài)。

掃描電鏡.jpg

二、固定

目的:保持微生物樣品的形態(tài)和結(jié)構(gòu),防止在后續(xù)處理中發(fā)生變化。

操作:將樣品放入含有固定劑(如2.5%戊二醛,pH=6.8)的容器中,通常置于4℃冰箱中固定一段時(shí)間(如1.5小時(shí))。固定劑的選擇和固定時(shí)間取決于微生物的種類和樣品特性。

三、沖洗

目的:去除固定劑殘留,減少對(duì)樣品的進(jìn)一步影響。

操作:使用適當(dāng)?shù)木彌_溶液(如pH=6.8的磷酸緩沖溶液)對(duì)樣品進(jìn)行多次沖洗,每次沖洗后應(yīng)確保將沖洗液完全去除。

四、脫水

目的:去除樣品中的水分,為后續(xù)的干燥處理做準(zhǔn)備。

操作:使用濃度逐漸遞增的乙醇溶液對(duì)樣品進(jìn)行脫水處理。通常從低濃度(如50%)開始,逐步增加至高濃度(如****),每次脫水時(shí)間一般為10-15分鐘。

五、置換

目的:用揮發(fā)性溶劑(如乙酸異戊酯)替換樣品中的乙醇,以便進(jìn)行后續(xù)的干燥處理。

操作:將樣品置于含有揮發(fā)性溶劑的容器中,進(jìn)行多次置換,確保乙醇被完全替換。

六、干燥

目的:去除樣品中的殘留溶劑,使樣品達(dá)到干燥狀態(tài)。

操作:使用適當(dāng)?shù)母稍锓椒ǎㄈ鏑O2臨界點(diǎn)干燥儀)對(duì)樣品進(jìn)行干燥處理。干燥過程中應(yīng)確保樣品不受損傷,并保持其原始形態(tài)和結(jié)構(gòu)。

七、粘樣

目的:將干燥后的樣品固定在SEM掃描電鏡的樣品臺(tái)上。

操作:使用導(dǎo)電膠布將樣品觀察面向上粘貼在掃描電鏡鋁板上,并確保樣品與樣品臺(tái)之間有良好的接觸。

八、噴金

目的:提高樣品的導(dǎo)電性,增強(qiáng)電子束在樣品表面的作用效果。

操作:使用離子濺射鍍膜儀在樣品表面鍍上一層金屬膜(如金膜),膜厚一般為1500nm左右。

九、進(jìn)樣和觀察

目的:將樣品放入掃描電子顯微鏡中進(jìn)行觀察和拍照。

操作:將樣品固定在掃描電子顯微鏡的進(jìn)樣室中,調(diào)整好樣品角度后將進(jìn)樣室推入機(jī)器內(nèi)。根據(jù)預(yù)設(shè)的電壓和樣品高度進(jìn)行抽真空處理,然后操作SEM對(duì)樣品進(jìn)行拍照和觀察。

注意事項(xiàng)

在整個(gè)制備過程中,應(yīng)盡量避免樣品的污染和損傷。

制備過程中使用的試劑和工具應(yīng)保持清潔和無菌。

制備完成后應(yīng)及時(shí)對(duì)設(shè)備進(jìn)行清潔和維護(hù),以確保其正常運(yùn)行和延長(zhǎng)使用壽命。

以上步驟僅為微生物樣品制備的一般流程,具體操作可能因微生物種類、樣品特性和實(shí)驗(yàn)要求而有所不同。在實(shí)際操作中,應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。

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